高壓液相色譜法 （HPLC） 是制藥和其他化學(xué)工業(yè)中*常用的技術(shù)之一，用于分離、定性和定量混合物的成分。混合物在高壓下通過溶劑（稱為流動相）通過色譜柱中的固定相。

在選擇用于 HPLC 的流動相時，選擇的溶劑將取決于分析物與固定相之間所需的相互作用類型。雖然有許多不同的色譜模式，但本文將重點介紹正相和反相色譜。流動相通常由兩種不同的組分組成：一種是促進(jìn)分析物在固定相上保留的弱組分，另一種是促進(jìn)分析物從色譜柱中洗脫的強(qiáng)組分。

用于正相色譜的流動相

正相 HPLC 的流動相弱部分必須是非極性（親脂性）溶劑。這是因為正相 HPLC 中的分離依賴于分析物對極性固定相的吸引力。非極性不會吸引分析物的分子，從而增加分析物在固定相中的保留時間。當(dāng)需要從色譜柱中洗脫分析物時，然后使用極性有機(jī)溶劑作為流動相的強(qiáng)部分。

*常用的正相流動相溶劑是：

• 己烷
• 庚烷
• 氯仿
• 苯
• 乙酸乙酯二氯甲烷
• 乙醇
• 異丙醇

用于反相色譜的流動相

對于反相 HPLC（*常用的 HPLC 模式）使用的流動相，弱溶劑本質(zhì)上必須是極性的，這樣它才能在分析物通過色譜柱時幫助排斥或推動分析物向非極性疏水性固定相。同樣，結(jié)果是分析物的保留時間增加。

反相 HPLC *常用的流動相是水。將水與有機(jī)改性劑以 0% 至 100% 的比例混合。改性劑可以是乙腈、甲醇或其他極性有機(jī)溶劑。增加有機(jī)改性劑或強(qiáng)溶劑將有助于從色譜柱中洗脫分析物。

溶劑在流動相中的混合

由于在 HPLC 流動相中很少使用單一溶劑，因此在混合溶劑時必須考慮以下因素：

• 混溶性 – 混合在一起的溶劑應(yīng)該能夠相互混溶，這意味著一種溶劑需要能夠與另一種溶劑溶解。將不混溶的溶劑一起使用可能會對色譜柱造成永 久性損壞。
• 溫度 – 溶劑在混合之前應(yīng)保持相同的溫度。讓他們在實驗室里坐一會兒就可以確保這一點。
• 純度 – 溶劑必須為 HPLC 級或更高等級，以確保分析具有低背景，并*大限度地減少對系統(tǒng)的長期損害。這包括使用的水，這些水應(yīng)該經(jīng)過反滲透。
• UV cut-off wavelength （紫外線截止波長） – 可以檢測溶劑的*低波長。選擇溶劑時，必須使其 UV 截止波長低于分析中的分析物。
• 折光率 – 溶劑混合時，其折光率應(yīng)與樣品的折光率明顯不同。
• 粘度 – 溶劑應(yīng)具有低粘度，以確保其能夠輕松流過固定相以實現(xiàn)有效的傳質(zhì)。粘度較高的溶劑會導(dǎo)致系統(tǒng)中的背壓升高，這可能會損壞組件并損壞色譜柱。
• 可壓縮性 – 溶劑的可壓縮性會影響流動相的流速。泵送系統(tǒng)保持流速一致，但所用溶劑的流速應(yīng)盡可能保持一致。